培養基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養基的制備和使用是微生物實(shí)驗室檢測工作的重要環(huán)節，培養基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。本文對微生物實(shí)驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，談一些觀(guān)點(diǎn)和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開(kāi)展工作。

1、培養基的購置與驗收

1.1 購置

從培養基自身的質(zhì)量來(lái)看，不同生產(chǎn)廠(chǎng)家的產(chǎn)品，甚至同一廠(chǎng)家不同批號的產(chǎn)品都會(huì )存在差異[1]。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實(shí)驗室能力的通用要求》，對培養基的供應企業(yè)進(jìn)行評價(jià)后選擇合格的供應商，這是培養基購買(mǎi)過(guò)程中重要的步驟。應選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；企業(yè)是否通過(guò)了質(zhì)量管理體系的認證是較為客觀(guān)的評價(jià)指標。要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養基成分名稱(chēng)及產(chǎn)品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價(jià)和所用測試菌株、技術(shù)數據清單、質(zhì)控證書(shū)以及必要的安全/危害數據等材料。

1.2 驗收

購買(mǎi)的培養基到貨后，應有專(zhuān)人做好接受和驗收工作，應仔細核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養基名稱(chēng)、規格數量、外觀(guān)特征、批號、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質(zhì)量進(jìn)行檢測，滿(mǎn)足檢測方法規定的要求后方可投入使用。

2、培養基的儲存

干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養基在室溫下的最長(cháng)保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個(gè)月內用完。應定期對儲存中的培養基進(jìn)行常規檢查，如容器密閉性復查、首次開(kāi)封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發(fā)生結塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3、培養基的制備

3.1 培養基用水

培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬(wàn)Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。

3.2 稱(chēng)量

稱(chēng)量時(shí)要用專(zhuān)用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結果；干粉培養基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱(chēng)取培養基。

3.3 復水

復水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長(cháng)；容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過(guò)程中，培養基溢出；含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘；加熱培養基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類(lèi)培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養基營(yíng)養物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現焦化，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基即不能使用，應重新制備。對于瓊脂類(lèi)培養基進(jìn)行再融化時(shí)應使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。

3.4 滅菌

一般培養基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15 min，含糖或特殊培養基，按照國家標準或生產(chǎn)商提供的說(shuō)明滅菌。已配制好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長(cháng)繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營(yíng)養成分，還會(huì )使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗證。

3.5 pH測定

微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長(cháng)繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值，即培養基使用前的pH，并應在25℃溫度下采用精密酸度計進(jìn)行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進(jìn)行測量。使用過(guò)程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL調整，注意不可反復調pH，否則會(huì )影響培養基的滲透壓。

3.6 配制好的培養基保存

滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長(cháng)時(shí)間保存在滅菌鍋內，造成過(guò)度滅菌，影響培養基的營(yíng)養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量，應該是在最長(cháng)保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完，應于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過(guò)2天，應將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類(lèi)培養基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。

4、培養基的性能測試

4.1 外觀(guān)控制

制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水。

4.2 污染控制

從每批制備好的培養基中選取部分進(jìn)行污染測試（無(wú)菌試驗），確定無(wú)微生物生長(cháng)方可使用。

4.3 性能測試

4.3.1 測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實(shí)驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來(lái)自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養基質(zhì)量檢驗規程》。

4.3.2 定量測試方法 改良Miles-Misra法 測試菌株過(guò)夜培養物10倍遞增稀釋?zhuān)粶y試平板和參照平板劃分為4個(gè)區域并標記；從最高稀釋度開(kāi)始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域；將稀釋液涂滿(mǎn)整個(gè)1/4區域，37°C培養18小時(shí)；對易計數的區域計數，按公式計算生長(cháng)率（生長(cháng)率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數）。非選擇性培養基上目標菌的生長(cháng)率應不低于0.7，該類(lèi)培養基應易于目標菌生長(cháng)；選擇性培養基上目標菌的生長(cháng)率應不低于0.1 。

4.3.3 半定量測試方法 改進(jìn)的劃線(xiàn)法接種法 平板分ABCD四區，共劃16條線(xiàn)，平行線(xiàn)大概相隔0.5cm，每條有菌落生長(cháng)的劃線(xiàn)記作1分，每個(gè)僅一半的線(xiàn)有菌落生長(cháng)記作0.5分，沒(méi)有菌落生長(cháng)或生長(cháng)量少于劃線(xiàn)的一半記作0分，分數加起來(lái)得到生長(cháng)指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長(cháng)，而非目標菌的生長(cháng)應部分或完全被抑制，目標菌的生長(cháng)指數G大于6時(shí)，培養基可接受 。

4.3.4 定性測試方法 平板接種觀(guān)察法 用接種環(huán)取測試菌培養物，在測試培養基表面劃平行直線(xiàn)。按標準中規定的培養時(shí)間和溫度對接種后的平板進(jìn)行培養，目標菌應呈現良好生長(cháng)，并有典型的菌落外觀(guān)、大小和形態(tài)，非目標菌應是微弱生長(cháng)或無(wú)生長(cháng) 。

5、討論

培養基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗室檢測工作的基礎，事關(guān)檢測工作的準確性、可靠性，在微生物實(shí)驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節的質(zhì)量問(wèn)題，都將導致檢驗結果科學(xué)性、客觀(guān)性的偏離。因此，加強培養基的實(shí)驗室質(zhì)量控制，認真地做好培養基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養基的質(zhì)控水平，才能為微生物檢測實(shí)驗室提供高質(zhì)量的培養基。