今天凱林小編給大家介紹一下微生物檢測的各種生化反應，什么是微生物生化反應？微生物生化反應：指用化學(xué)反應來(lái)測定微生物的代謝產(chǎn)物，生化反應常用來(lái)鑒別一些在形態(tài)和其他方面不易區別的微生物，因此微生物生化反應是微生物分類(lèi)鑒定中的重要依據之一

微生物檢驗中常用的生化反應有：

一、糖酵解試驗

不同微生物分解利用糖類(lèi)的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣?？捎弥甘緞┘鞍l(fā)酵管檢驗。

試驗方法：以無(wú)菌操作，用接種針或環(huán)移取純培養物少許，接種于發(fā)酵液體培養基管，若為半固體培養基，則用接種針作穿刺接種。接種后，置36±1.0℃培養，每天觀(guān)察結果，檢視培養基顏色有無(wú)改變（產(chǎn)酸），小倒管中有無(wú)氣泡，微小氣泡亦為產(chǎn)氣陽(yáng)性，若為半固體培養基，則檢視沿穿刺線(xiàn)和管壁及管底有無(wú)微小氣泡，有時(shí)還可看出接種菌有無(wú)動(dòng)力，若有動(dòng)力、培養物可呈彌散生長(cháng)。

本試驗主要是檢查細菌對各種糖、醇和糖苷等的發(fā)酵能力，從而進(jìn)行各種細菌的鑒別，因而每次試驗，常需同時(shí)接種多管。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫，溴百里藍和an-drade指示劑。

二、淀粉水解試驗

某些細菌可以產(chǎn)生分解淀粉的酶，把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再變藍色。

試驗方法：以18~24h的純培養物，涂布接種于淀粉瓊脂斜面或平板（一個(gè)平板可分區接種，試驗數種培養物）或直接移種于淀粉肉湯中，于36±1℃培養24~48h，或于20℃培養5天。然后將碘試劑直接滴浸于培養表面，若為液體培養物，則加數滴碘試劑于試管中。立即檢視結果，陽(yáng)性反應（淀粉被分解）為瓊脂。培養基呈深藍色、菌落或培養物周?chē)霈F無(wú)色透明環(huán)、或肉湯顏色無(wú)變化。陰性反應則無(wú)透明環(huán)或肉湯呈深藍色。

淀粉水解系逐步進(jìn)行的過(guò)程，因而試驗結果與菌種產(chǎn)生淀粉酶的能力、培養時(shí)間，培養基含有淀粉量和ph等均有一定關(guān)系。培養基ph必須為中性或微酸性，以ph7.2最適。淀粉瓊脂平板不宜保存于冰箱，因而以臨用時(shí)制備為妥。

三、V-P試驗

某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱(chēng)v－p（+）反應。

試驗方法：

o’meara氏法：將試驗菌接種于通用培養基，于36±1℃培養48h，培養液1ml加o’meara試劑（加有0.3%肌酸creatine或肌酸酐creatinine的40%氫氧化鈉水溶液）1ml，搖動(dòng)試管1~2min，靜置于室溫或36±1℃恒溫箱，若4h內不呈現伊紅、即判定為陰性。亦有主張在48~50℃水浴放置2h后判定結果者。

barritt氏法：將試驗菌接種于通用培養基，于36±1℃培養4天、培養液2.5ml先加入5°cα萘酚（2-na-phthol）純酒精溶液0.6ml，再加40%氫氧化鉀水溶液0.2ml，搖動(dòng)2~5min，陽(yáng)性菌常立即呈現紅色，若無(wú)紅色出現，靜置于室溫或36±1℃恒溫箱，如2h內仍不顯現紅色、可判定為陰性。

快速法：將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產(chǎn)酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養物一接種環(huán)，乳化接種于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動(dòng)后放置5min，判定結果。不產(chǎn)酸的培養物不能使用。

本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時(shí)，通用培養基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產(chǎn)生，故應省去或以氯化鈉代替。

四、甲基紅（methyl red）試驗

腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過(guò)程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養基ph值下降至ph4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。

試驗方法：挑取新的待試純培養物少許，接種于通用培養基，培養于36±1℃或30℃（以30℃較好）3~5天，從第二天起，每日取培養液1ml，加甲基紅指示劑1~2滴，陽(yáng)性呈鮮紅色，弱陽(yáng)性呈淡紅色，陰性為黃色。迄至發(fā)現陽(yáng)性或至第5天仍為陰性、即可判定結果。

甲基紅為酸性指示劑，ph范圍為4.4~6.0，其pk值為5.0。故在ph5.0以下，隨酸度而增強黃色，在ph5.0以上，則隨堿度而增強黃色，在ph5.0或上下接近時(shí)，可能變色不夠明顯，此時(shí)應延長(cháng)培養時(shí)間，重復試驗。

五、靛基質(zhì)（imdole）試驗

某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來(lái)。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。

試驗方法：將待試純培養物小量接種于試驗培養基管，于36±1℃培養24h時(shí)后，取約2ml培養液，加入kovacs氏試劑2~3滴，輕搖試管，呈紅色為陽(yáng)性，或先加少量乙醚或二甲苯，搖動(dòng)試管以提取和濃縮靛基質(zhì)，待其浮于培養液表面后，再沿試管壁徐緩加入kovacs氏試劑數滴，在接觸面呈紅色，即為陽(yáng)性。

實(shí)驗證明靛基質(zhì)試劑可與17種不的靛基質(zhì)化合物作用而產(chǎn)生陽(yáng)性反應，若先用二甲苯或乙醚等進(jìn)行提取，再加試劑，則只有靛基質(zhì)或5-甲基靛基質(zhì)在溶劑中呈現紅色，因而結果更為可靠。

六、硝酸鹽（nitrate）還原試驗

有些細菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗。

試驗方法：臨試前將試劑的a（磺胺酸冰醋酸溶液）和b（α－萘胺乙醇溶液）試液各0.2ml等量混合、取混合試劑約0.1ml、加于液體培養物或瓊脂斜面培養物表面，立即或于10min內呈現紅色即為試驗陽(yáng)性，若無(wú)紅色出現則為陰性。用α-萘胺進(jìn)行試驗時(shí)，陽(yáng)性紅色消退很快、故加入后應立即判定結果。進(jìn)行試驗時(shí)必須有未接種的培養基管作為陰性對照。α-萘胺具有致癌性、故使用時(shí)應加注意。

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