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培養基的滅菌及使用
1.每次配置時(shí),要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內,查看其開(kāi)瓶日期及瓶口密封性,保證其未變質(zhì),并且未吸潮。
2.培養基配置時(shí),稱(chēng)量要準確,包括鹽水的分裝要準確。
3.一定要保證現配制現滅菌,未滅菌的配好培養基不能長(cháng)時(shí)間放置,更不可隔夜。
4.滅菌時(shí)要保證恒溫、恒壓,同時(shí)要保證有效滅菌時(shí)間。
5.滅菌過(guò)的培養基要冰箱保存,可保存一周,一般不超過(guò) 3 天。而且要遵循“先入先出”原則,先配制的要先使用。
6.在使用時(shí),要根據當班次的使用量,用水浴鍋先將培養基溶化為液態(tài),然后及時(shí)調低水域溫度(先化好的可從水域取出,放在水浴鍋鍋蓋上)待用,千萬(wàn)不可長(cháng)時(shí)間使培養基處于高溫狀態(tài)。
7.做產(chǎn)品微生物檢測時(shí),傾倒培養基溫度在 45℃左右,不可過(guò)燙,避免將菌燙死;也不可過(guò)涼,化好的培養基又結塊凝固,不便于觀(guān)察結果。
8.每瓶培養基均要做空白。
9.盡量集中做樣,避免頻繁打開(kāi)同一瓶培養基瓶塞,增大培養基的污染幾率,出現誤差結果。
10.培養基剩余過(guò)少時(shí),可先將其傾倒成空白用板。
一、大環(huán)境(房間) 1.做樣時(shí),窗戶(hù)和空調要關(guān)閉,或用酒精對房間進(jìn)行噴霧消毒,避免房間內空氣流通影響超凈臺內部環(huán)境(最好在有通排風(fēng)系統的恒溫恒濕無(wú)菌間進(jìn)行操作)。 2.如果在原來(lái)的原料微生物檢測室進(jìn)行做樣,要定期開(kāi)啟紫外燈,對房間進(jìn)行殺菌。 二、小環(huán)境(超凈臺) 1.定期清潔初效過(guò)濾器,要及時(shí)更換。 2.做樣前,將超凈臺內部進(jìn)行清潔,用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,并提前半小時(shí)將超凈臺紫外燈打開(kāi),對超凈臺內部環(huán)境進(jìn)行殺菌。 3.關(guān)紫外燈,開(kāi)風(fēng)機,調整合適進(jìn)風(fēng)量,風(fēng)量不可過(guò)低。 4.每次做樣后,要對超凈臺內部進(jìn)行清理、清潔,并用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。 5.紫外燈根據其使用壽命要及時(shí)更換。 6.做樣同時(shí),要做上相應菌落檢測的環(huán)境空白。 7.做樣區域的選擇: ①一般在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區域進(jìn)行無(wú)菌操作; ②要在酒精燈火焰的外焰保護區域進(jìn)行操作。
1.玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌。 2.做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專(zhuān)用,不可與其它操作器具混用,使用時(shí),先用75%酒精消毒,再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌。 3.接種針(環(huán))采用灼燒方式進(jìn)行滅菌,但要注意做樣時(shí)要先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻。
一、保證采樣器具的無(wú)菌性 1.玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌,保證恒溫、時(shí)間足夠(但不可時(shí)間過(guò)長(cháng),導致玻璃器皿易裂紋而報廢)。 2.取樣筐:使用前要用 75%酒精進(jìn)行噴灑消毒 3.取樣勺、濃奶取樣提子:要保證其清潔消毒,清潔后用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。 4.取樣袋:可現用酒精進(jìn)行擦拭消毒,再在超凈臺用紫外燈照射消毒,(包裝車(chē)間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。 5.電子稱(chēng)表面用 75%酒精消毒。 二、人員操作 1.保證手部的清洗、消毒:取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。 2.取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標示清楚。 3.取樣完畢,不可在車(chē)間逗留,要及時(shí)將樣品放入超凈臺,對其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒。 4.在要求的做樣區域進(jìn)行操作。 5.做樣前,要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進(jìn)行擦拭消毒,再開(kāi)口。 6.往鹽水瓶加樣品時(shí),要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。 7.樣品計量要準確,稀釋倍數也要準確(1mL 吸管不允許將管口敲掉),進(jìn)行 100 倍稀釋時(shí),1mL 吸管要伸入鹽水中,不可以將樣品管壁流下去,同時(shí)要避免將管底部捅破。 8.鹽水溫度以 40℃左右為宜,不能過(guò)熱,將部分微生物燙死,也不能溫度太低,不能將奶粉溶解完全。 9.進(jìn)行稀釋時(shí),要搖勻,保證溶液的均一性。 10.傾倒平皿時(shí),要注意培養基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養基要適量,不可以太少,在培養過(guò)程中干掉,微生物亦死亡,以 15mL 左右為宜。 11.做大腸菌群樣時(shí),要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好,放入超凈臺對外表面進(jìn)行紫外線(xiàn)滅菌。 12.接二步時(shí),要注意先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻,避免出現接不上菌落的情況發(fā)生,導致無(wú)法判斷、確認。 13.做樣完畢,及時(shí)放入相應培養箱進(jìn)行培養,并清理清潔超凈臺。 1.在培養過(guò)程中,要隨時(shí)監控培養箱溫度,保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養。 2.要按照《微生物檢驗規范》要求及時(shí)觀(guān)察結果,出現異常,要及時(shí)分析原因進(jìn)行反饋。