培養基的制備

發(fā)布日期：2022-06-24 作者：點(diǎn)擊：

培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬(wàn)Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水.

稱(chēng)量

稱(chēng)量時(shí)要用專(zhuān)用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱(chēng)取培養基.

培養基廠(chǎng)家

復水

復水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長(cháng);容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過(guò)程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌,特別是瓊脂類(lèi)培養基.為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱.燒糊的培養基營(yíng)養物質(zhì)被破壞,并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),如發(fā)現焦化,或未溶解均勻前培養基有溢出,該培養基即不能使用,應重新制備.

滅菌

一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121攝氏度15 分鐘,含糖或特殊培養基,按照國家標準或生產(chǎn)商提供的說(shuō)明滅菌.已配制好的培養基必須立即滅菌,避免微生物生長(cháng)繁殖而消耗養分,改變培養基的酸堿度.高溫可破壞培養基的營(yíng)養成分,還會(huì )使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時(shí)間,并且不可重復滅菌.高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗證.

pH測定

微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長(cháng)繁殖或體現其生物特性.培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,即培養基使用前的pH,并應在25攝氏度溫度下采用精密酸度計進(jìn)行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進(jìn)行測量.使用過(guò)程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L Na0H或lmol/L HCL調整,注意不可反復調pH,否則會(huì )影響培養基的滲透壓.

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